Identification et Caractérisation Moléculaire des Agents Pathogènes Associés aux Infections du Site Opératoire en Gynécologie Obstétrique

Les infections du site opératoire (ISO) sont l'une des infections associées aux soins de santé les plus courantes dans les pays à revenu faible. Les objectifs de ce travaille consistent à estimer l’incidence de survenu des ISO en gynécologie obstétrique, l’identification des agents pathogènes associés et la caractérisation moléculaire de leurs phénotypes de résistance aux antibiotiques. Les patientes ayant subi un acte chirurgical entre Janvier 2020 et Décembre 2021 au service de gynécologie obstétrique à l'hôpital Abdallah Nouaouria, el Bouni Annaba, ont été incluses. Chaque femme a été suivie pendant 30 jours post-opératoires et les données socio-démographiques ont été recueillies pour définir les différents facteurs de prédilection. L’analyse bactériologique des prélèvements de pus des ISO, basée sur la culture en divers milieux ordinaires et spécifiques enrichis, a permis d’identifier les bactéries responsables et de déterminer leurs phénotypes de résistance aux antibiotiques. La caractérisation moléculaire par la PCR standard et la RT-PCR ont permis de détecter les gènes de résistance, suivi du séquençage de Sanger pour la détermination des variants spécifiques de chaque gène, et d’un séquençage génomique de nouvelle génération Miseq Illumina pour le séquençage du génome complet. Sur 2709 patientes, nous avons enregistré 52 cas d’ISO. La plupart des interventions chirurgicales avaient un motif d’urgence (69 %). Les comorbidités les plus fréquentes sont l'anémie (31 %) et un score ASA 2 (46,2 %). Parmi les 65 bactéries isolées, les entérobactéries étaient les plus fréquentes (74 %), prédominées par les souches d'Escherichia coli (50 %). Le phénotype de résistance majoritairement exprimé par les BGN était les BLSE (41 %). Bien que les cocci à Gram positif soient moins fréquentes (26%), une majorité d'Enterococcus faecalis (63 %) a été observée. L'assemblage du génome des isolats d'E. faecium Q7358 et d'E. faecium Q7360 résultants du séquençage génomique donne une longueur chromosomique totale de 2 923 802 pb (37,76 % CG) et de 2 927 224 pb (37,74 % GC) respectivement. L'annotation du génome révèle la présence du géne de resistance à la vancomycine vanA dans un systéme opéron. Le génotypage effectué par MLST montre qu'ils appartiennent au clone ST80. De plus, l'analyse génomique comparative a révélé un plasmide rep17 avec un élément de type Tn1546 rapporté pour une première fois en Algérie. Pour conclure, cette étude met à jour une faible fréquence des ISO en gynécologie obstétrique à l'EHS El bouni d'Annaba. Une faible fréquence n’exclus pas l’absence totale du risque infectieux, de ce fait une surveillance extensive des populations à risque et un dépistage rapide et régulière des profils de résistance devrait être incorporée systématiquement dans les programmes de contrôle.

Implication de la Ghréline et des Cellules-Souches Neurales dans la Réversion de la Cachexie Cancéreuse avec ou sans Expansion Tumorale

Ma thèse concerne l’effet de la signalisation ghréline sur les cellules-souches neurales du complexe vagal (centre neurovégétatif du cerveau) et sur les cellules-souches de l’épithélium de prostate chez la souris adulte, et sur la prédisposition au cancer de la prostate chez l’Homme. Dans la première partie, j’ai chercher l’action de ghréline et de son agoniste JMV- 2894 sur les cultures primaires de neurosphères d’area postrema et de prostatosphères de Souris adulte, montrant que les deux agonistes stimulent l’autorenouvellement des cellules-souches de ces deux tissus. La RT-qPCR sur ARN extraits de ces sphères a montré que l’effet de la ghréline s’exerce sans variation d’expression de cycline D1 ni de récepteur de ghréline. In vivo, en utilisant des cages métaboliques informatisées, j’ai caractérisé le décours de l’effet stimulateur de la ghréline et du JMV-2894 sur la prise alimentaire chez la souris adulte. Dans une deuxième partie, j’ai effectué une étude génétique dans le but de trouver une association entre les variants des gènes de la ghréline et/ou de son récepteur GHSR-1a et le risque du cancer de la prostate (CaP) dans une population Algérienne. Il s’agit d’une étude d’association des ADN génomiques d’une cohorte de sujets algériens suivis au service d’urologie d’Annaba portant sur les variants génétiques suivants : rs696217, rs4684677 et rs34911341 (gène GHRL) et rs2948694, rs572169 et rs2922126 (gène GHS-R). Il s’agit d’une première étude réalisée sur 6 SNPs (GHRL et GHS-R) dans le cas du CaP. Cette étude a concerné 120 malades et 95 témoins. Le génotypages des SNPs étudiés a été effectué par TaqMan PCR. La distribution des variants, génotypiques et haplotypiques ainsi que le déséquilibre de liaison entre les deux groupes ont été établis grâce au logiciel Haploview. Nous avons également décrit la relation des 6 SNPs avec le phénotype quantitatif IMC dans la population étudiée. D’autre part, nous avons réalisé pour la première fois une approche d'exploration de données MDR (réduction de la dimensionnalité multifactorielle) afin de détecter les interactions gène et environnement (IMC) des SNPs GHRL/GHSR dans le cas du CaP. À notre connaissance, il s'agit du premier rapport sur l’effet d'interaction de l’IMC et le polymorphisme des gènes GHRL et GHS-R chez les malades CaP. Les résultats ont montré qu’il n’existait aucune différence significative de distribution des fréquences alléliques, génotypiques et haplotypiques des polymorphismes explorés entre les cas et les contrôles (p>0,05). Par ailleurs, nous avons noté une association significative entre le génotype homozygote TT du variant rs2922126 (GHSR) (p = 0,040) avec le risque du CaP (p = 0,04). Un DL a été observé entre les variants rs2922126 et rs572169 (D’ = 0,60). L'analyse MDR a montré une interaction épistatique potentielle entre les SNPs rs572169, rs2922126. Pour l’interaction GHRL-IMC, le modèle rs4684677, rs34911341, IMC est le meilleur. Pour l’interaction GHSR-IMC, Le modèle rs572169, rs2922126, rs2948694, IMC est le meilleur. En conclusion, Nous n’avons pas trouvé d’association entre les SNPs étudiés et le CaP. Cependant, lorsque les polymorphismes sont analysés de manière combinée par la méthode MDR, une interaction significative peut être identifiée puisque l'effet combiné des deux polymorphismes est plus fort. L'analyse de l'épistasie peut constituer un excellent outil pour identifier les individus présentant un risque élevé de développer le CaP, qui peut servir de cible thérapeutique.

Caractérisation Polyphasique des Cyanobactéries Peuplant le Réservoir Cheffia, Nord-Est de l’Algérie

Le réchauffement climatique et l’eutrophisation sont les principaux paramètres associés au développement des blooms de cyanobactéries, à la dynamique des cyanobactéries et à l’apparition de nouveaux taxons particulièrement toxiques. Ainsi, des populations naturelles de cyanobactéries d’un réservoir d’eau douce du Nord-Est de l’Algérie d’intérêt socio-économique, le réservoir Cheffia, ont été étudiées. Les échantillons ont être analysés en utilisant une approche polyphasique. Ainsi, l’identification des cyanobactéries a été réalisée sur la base de l’analyse morphologique, moléculaire culture-indépendante en utilisant le séquençage de nouvelle génération (NGS), de méthodes culture-dépendantes et de la localisation de gènes reliés à la synthèse des toxines. Les paramètres physico-chimiques des eaux ont été également étudiés ainsi que l’identification des toxines. Les résultats obtenus ont monté que les eaux du réservoir Cheffia ont été classées dans la catégorie hypereutrophe. La communauté des cyanobactéries dans cet écosystème consistait en cinq ordres : Chroococcales, Oscillatoriales, Nostocales, Synechococcales et Chroococcidiopsidales subdivisés en 28 genres avec la dominance de Microcystis (34.19%), Aphanizomenon (20.13%) et Planktothrix (20.00%). D’autre part, l’analyse morphologique a révélé l’association dans ce plan d’eau de cinq espèces du genre Microcystis: M. aeruginosa, M. novacekii, M. panniformis, M. ichthyoblabe et M. flos-aquae. La présence des génotypes mcyE a été détectée dans la population identifiée et les analyses biochimiques des microcystines (MCs) par HPLC-PDA et LC-ESI-MS/MS ont permis l’identification de la microcystine-LR (MC-LR). Les études cultures-dépendantes ont permis l’identification d’un nouveau groupe dans cet écosysteme, les picocyanobactéries, avec un génotype toxique. Nous suggèront que l’eutrophisation est une cause possible de la diversité et la complexité de la population des cyanobactéries dans cet écosystème. D’autre part, l’effet de la température ne peut pas être exclu mais devrait être confirmé par un échantillonnage plus large au cours de différentes saisons et par des analyses de laboratoire. Ainsi, l’eutrophisation dans cet écosystème devrait être surveillée pour prévenir le développement de blooms toxiques.

Evaluation Biochimique et Immunologique d’une nouvelle classe de sulfonamides chez le rat diabétique

Les sulfamides hypoglycémiants (les sulfonylurées) constituent un groupe pharmacologique, parmi les classes des antidiabétiques oraux, les plus utilisées actuellement pour le traitement du diabète de type 2. La présente étude a pour objectif l’évaluation, in vivo, des effets d’une molécule néosynthétisée, le 3,4-dihydroisoquinoline-2(1H)-sulfonamide, sur l’équilibre glycémique, le rapport reino-corporel et la fonction rénale chez des rats mâles de souche Wistar, rendus diabétiques par une injection intrapéritonéal de 120 mg/kg d’alloxane. Ces animaux ont été repartis en cinq lots, dont 2 témoins et 3 diabétiques traités respectivement, per os, avec le glibenclamide à 2,5 mg/kg, le sulfamide nouvellement synthétisé à 2,5 et 5 mg/kg, et ce pendant neuf jours. Un prélèvement sanguin a été effectué, quotidiennement, durant la période de traitement pour suivre l’évolution de la glycémie. Au 10ème jour les rats ont été sacrifiés; les reins ont été prélevés et pesées, Un dosage spectrophotométrique des paramètres sériques du bilan rénal (urée, créatinine et acide urique) a été également réalisé. Nos résultats révèlent une hyperglycémie permanente et évolutive, provoquée par le diabète expérimental, allant de 298,51 ± 18,04 à 396,20 ± 27,50 mg/dl. Une perturbation de la fonction rénale a été également constatée dans les rats diabétiques. Le traitement par la nouvelle molécule a restauré le niveau glycémique, atteignant la valeur minimale de 138,63 ± 16,06 mg/dl. Il a, en outre, diminué le rapport reino-corporel, l’urémie, la créatininémie et l’uricémie. Ces résultats, préliminaires, montrent que le sulfamide néosynthétisé possèderait une action néphroprotective et une activité anti-hyperglycémiante intéressante et comparable au sulfamide antidiabétique commercialisé : le glibenclamide.

Evaluation de l’Activité Antimicrobienne et de l’Effet Génotoxique, in vitro, de Molécules Chimiques Néosynthétisées

L'augmentation et la dissémination rapide de la résistance bactériennes aux antibiotiques sont probablement l'un des problèmes de santé publique les plus inquiétants. La synthèse de nouvelles molécules antibactériennes, constitue une des alternatives actuelles pour pallier aux insuffisances des antibiotiques disponibles. Le but de notre travail est d’évaluer l’activité antibactérienne de deux séries de sulfamides néosynthétisées 1a-d et 2a-f, ainsi que leur potentiel cytotoxique et génotoxique. Tout d’abord, 262 souches cliniques (à Gram positif et à Gram négatif) ont été isolées, identifiées et testées contre les antibiotiques standards. L’antibiogramme ainsi que l’évaluation de l’activité antibactérienne des nouvelles molécules a été réalisés par la méthode de diffusion sur milieu solide. La CMI et la cinétique d’évolution des sulfamides ont été évalués sur milieu liquide. L’évaluation de la stabilité structurale et de l’activité antibactérienne en fonction du temps de conservation a été déterminée par CCM et sur les souches de références. L’évaluation de l’effet cytotoxique a été réalisée par le test de létalité sur les nauplii d’Artemia salina en déterminant la CL50. L’évaluation de l’effet génotoxique a été réalisée par le test d’Ames ainsi que le SOS Chromotest. Les résultats obtenus montrent que la première série de sulfamides 1a-d a montré une importante activité antibactérienne avec des diamètres de zones d’inhibition et des CMI intéressantes ; la molécule 1a n’a donné d’activité qu’avec les souches à Gram positif. La deuxième série de sulfamides a donné une bonne activité antibactérienne avec la totalité des souches cliniques montrant des taux de sensibilité allant jusqu’à 100%. L’état de stabilité structurale et fonctionnelle de toutes les molécules a été confirmé. L’évaluation de la cytotoxicité a révélée que seule la molécule 1a était cytotoxique vis-à-vis des nauplii d’A. salina. L’évaluation de la génotoxicité par le test d’Ames utilisant 3 souches de S. typhimurium TA100, TA98 et laTA1535 a montré que les molécules 1a, 1b et 1d de la première série ont un effet génotoxique, ainsi que les 3 molécules cycliques 2d-f de la deuxième série. Les résultats du SOS Chromotest confirment ces résultats. Seules les molécules 1c, 2a, 2b et 2c ayant une bonne activité antibactérienne, pas d’effet cytotoxique ni génotoxique (mutagène) peuvent présenter un espoir thérapeutique dans la lutte contre les bactéries multirésistantes.

Evaluation de l’activité antibactérienne et de l’effet génotoxique de trois dérivés de sulfonamides innovants

La synthèse de nouveaux dérivés de sulfonamides, ayant une activité antimicrobienne importante mais aussi une toxicité moindre, est l’une des stratégies les plus importantes pour la recherche de nouveaux traitement alternatifs contre les souches résistantes aux antibiotiques commercialisés. L’objectif de cette étude consiste d’une part à étudier la résistance aux antibiotiques de 304 souches bactériennes uropathogènes, et d’autre part à évaluer l’activité antibactérienne et l’effet génotoxique de trois dérivés de sulfonamides innovants. L’étude du comportement des bactéries vis-à-vis des antibiotiques a été réalisée par la méthode de disque sur milieu gélosé. Les résultats obtenus montrent que la majorité des souches, sont résistantes aux β-lactamines ; le pourcentage de résistance le plus élevé est observé avec l’ampicilline (95,5%) et la pénicilline (94,87%). Par ailleurs, les aminosides gardent une bonne efficacité ; la gentamicine reste l’antibiotique le plus actif aussi bien vis-à-vis des entérobactéries (8,44%) que des pseudomonas (9,01%) et des staphylocoques (12,82%). L’évaluation de l’activité antibactérienne des nouveaux dérivés de sulfonamides (PCSU, DIS et PPS) a montré que tous les dérivés ont donné une bonne activité antibactérienne. Les diamètres d’inhibition sont importants, allant jusqu’à 40 mm et les CMI varient entre1 et 512µg/ml. Le dérivé PCSU a donné la plus forte activité antibactérienne suivie respectivement des dérivés DIS et PPS. L’association de chacun des nouveaux dérivés avec le triméthoprime a montré que le dérivé PCSU a présenté une synergie d’action avec le triméthoprime sur toutes les souches bactériennes testées sauf P.aeruginosa qui résiste naturellement au triméthoprime. La vérification de la stabilité et de la conservation des trois dérivés de sulfonamides a révélé que le PCSU est le dérivé le plus stable. En effet, après 21 mois de conservation à l’obscurité et à 6 °C, le PCSU a gardé son activité antibactérienne. Par ailleurs, l’exposition des trois dérivés à la lumière naturelle et au rayons UV a permis de mettre en évidence la dégradation et l’inactivation des dérivés de sulfonamides. L’évaluation du potentiel génotoxique des nouveaux dérivés de sulfonamides a été réalisée par le test d’Ames en utilisant les souches de S. typhimirium : TA98, TA100 et TA102. Les deux dérivés PCSU et DIS ont été trouvé non génotoxiques sur les trois souches testées avec et sans activation métabolique. Par ailleurs, le dérivé PPS et l’antibiotique commercialisé SXT n'induisent pas d’effet génotoxique avec les souches TA98 et TA100, mais entrainent des mutations de type substitution de paires de bases chez la souche TA102 en présence d’un système d’activation métabolique exogène (S9 mix).

Polymorphisme HLA et Expression Menin/HSP27 dans le Cancer de la Prostate dans une Population de l’Est Algérien

Le dépistage du cancer de la prostate repose sur deux tests, le PSA et le toucher rectal. Toutefois, le PSA n'est pas spécifique pour confirmer le stade du CaP, ce qui conduit à des résultats faussement positifs et implique un surdiagnostic et un surtraitement du CaP. Il a été démontré que la protéine HSP27 et Menin étaient surexprimées dans un large éventail de cancers humains. Des études récentes ont montré comment HSP27 interagit avec Menin et la stabilise pour conduire à la progression du CaP et à la résistance au traitement. Le but de notre étude était d'évaluer la corrélation entre l'expression moléculaire de HSP27 et de Menin dans le cas du CaP avancé ainsi que leur valeur diagnostic et pronostique. L'Elisa et l'immunohistochimie (IHC) ont été utilisées pour mettre en évidence l’intérêt de HSP27 et de Menin en tant que biomarqueurs tumoraux. L'expression sérique de HSP27 est en corrélation avec son expression tissulaire chez tous les patients CaP, tandis que l'expression sérique de Menin est en corrélation avec son expression tissulaire uniquement dans le cas du CaP agressif. De plus, il existe une corrélation positive entre HSP27 et Menin aussi bien dans le sérum (p = 0,021) que dans les tissus (p < 0,0001). Dans les CaP agressifs, l'expression sérique de HSP27 et de Menin était positivement corrélée (p = 0,001). L’augmentation de l'expression de HSP27 et de Menin est significativement corrélée à une survie plus courte des patients présentant un CaP. L'exactitude de la prédiction de l'agressivité a été quantifiée par l’AUC. La combinaison HSP27/Ménine a montré un meilleur résultat que la combinaison HSP27/Ménine/PSA (AUC=0,824 versus AUC=0,569 ; p < 0,0001). D’autre part, nous avons démontré que les allèles HLA influencent l'évolution et la progression du CaP, bien que les mécanismes sous-jacents restent peu clairs. Les allèles HLA-C et HLA-DQB1 ont montré plus particulièrement une association significative avec l’Age, l’hormonoresistance et Menin. Nos travaux suggèrent le rôle potentiel de HSP27/Ménine et éventuelle des molécules HLA en tant que biomarqueurs potentiels de diagnostiques et de pronostiques.

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